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親權鑒定技術規范(2016修訂版)

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  • 2020-12-06 15:18:47
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親權鑒定技術規范-SF/Z JD0105001-2016-(2016修訂版)(2016年9月22日發布實施)
1、范圍
本技術規范規定了我國法醫DNA實驗室進行親權鑒定所必須遵循的技術要求。
本技術規范適用于從事親權鑒定的DNA實驗室,不適用于大通量數據庫的比對。
2、規范性引用文件
下列文件對于本文件的應用是不可少的。凡是標注日期的引用文件,僅標注日期的版本適用于本文件。凡是不標注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。
GA/T382-2014  法庭科學DNA實驗室建設規范
GA/T383-2014  法庭科學DNA實驗室檢驗規范
GA/T965  法庭科學DNA親子鑒定規范
CNAS-CL08  司法鑒定/法庭科學機構能力認可準則
CNAS-CL28  司法鑒定/法庭科學機構能力認可準則在法醫物證DNA鑒定領域的應用說明
3、術語和定義
下列術語和定義適用于本技術規范。
3.1  
親權鑒定  Parentage Testing
親權鑒定是通過對人類遺傳標記的檢測,根據遺傳規律分析,對個體之間血緣關系的鑒定。
3.2  
三聯體親子鑒定  Parentage Testing of Trios
被檢測男子、孩子生母與孩子的親子鑒定或者被檢測女子、孩子生父與孩子的親子鑒定。
3.3  
二聯體親子鑒定  Parentage Testing of Duos
被檢測男子與孩子的親子鑒定或被檢測女子與孩子的親子鑒定。
3.4  
遺傳標記  Genetic Marker
具有多態性的基因座。用于親子鑒定的遺傳分析系統由一定數量的遺傳標記組成,常用的有常染色體短串聯重復序列(STR)、Y染色體短串聯重復序列(Y-STR)、X染色體短串聯重復序列(X-STR)。
3.5  
排除概率  Power of Exclusion, PE
對于不是孩子生父的隨機男子,遺傳分析系統具有的排除能力。它是遺傳分析系統效能的評估指標。
3.6  
親權指數  Parentage Index, PI
親權指數是親權關系鑒定中判斷遺傳證據強度的指標。它是兩個條件概率的似然比率:


4、總則
從事親子鑒定的機構應符合CNAS-CL08:2013中4.1條款的要求或是獲得法醫物證鑒定資質的機構。應當定期參加親子鑒定的能力驗證計劃并考核合格。
5、檢驗程序
5.1 采樣要求
對于三聯體,采集被檢測男子、孩子生母與孩子的樣本用于檢驗;對于二聯體,采集被檢測男子與孩子的樣本用于檢驗。樣本一般是血液(斑)或口腔拭子(唾液斑),其它人體生物學材料如精液(斑)、帶毛囊毛發、羊水、組織塊等亦可作為親權鑒定的樣本。對于接受了外周血干細胞移植的當事人,應避免采集其血樣作為檢驗材料,宜取其口腔拭子(唾液斑)或毛發進行檢驗。樣本必須分別包裝,注明被采樣人姓名、編號、采樣人、采樣日期等,置于冰箱冷藏或凍存。
采樣時,需要填寫采樣單,寫明委托方名稱、采樣日期、采樣類型、被采樣人姓名、性別、稱謂、出生日期、證件號碼等,并拍攝被采樣人照片,由被采樣人在采樣單上留下右手拇指或食指指紋(嬰兒可留右腳拇趾印),并簽名確認(嬰幼兒的姓名由其監護人代簽)。
鑒定機構應有用于檢材/樣本的運輸、接收、處置、保護、存儲、保留和/或清理的規定,應對接收、內部傳遞、處置、保留、返還和清理等過程進行記錄,確保“保管鏈”記錄的完整性和可追溯性。
鑒定機構應具有能識別各檢材/樣本的標識系統,并確保檢材/樣本在本鑒定機構的整個期間能得到持續的識別。
5.2 DNA提取和純化
檢材的DNA提取和純化方法見GA/T383-2014中附錄A內容。
5.3 DNA定量分析
見GA/T 383-2014中6.1~6.3條款內容。
5.4 PCR擴增與分型
5.4.1 基因座
5.4.1.1  選用多態性基因座(如STR、SNP等類型)進行PCR擴增,其中,常染色體STR基因座宜符合如下要求:
1) 基因座定義和具有的特征已有文獻報道;
2) 種屬特異性、靈敏性、穩定性研究已實施;
3) 已有可供使用并公開發表的群體遺傳數據,群體遺傳數據包括從有關人群中獲得的該基因座等位基因頻率或單倍型頻率及突變率;
4) 遺傳方式符合孟德爾定律;
5) 串聯重復單位為四或五核苷酸。
5.4.1.2  除常染色體基因座外,建議在需要時增加Y-STR、X-STR的檢驗。其中,Y-STR系統可選擇DYS456、DYS389I、DYS390、DYS389II、DYS458、DYS19、DYS385 a/b、DYS393、DYS391、DYS439、DYS635、DYS392、Y GATA H4、DYS437、DYS438、DYS448等基因座進行單倍型檢驗;X-STR系統可選用GATA172D05、HPRTB、DXS6789、DXS6795、DXS6803、DXS6809、DXS7132、DXS7133、DXS7423、DXS8377、DXS8378、DXS9895、DXS9898、DXS10101、DXS10134、DXS10135、DXS10074等。
5.4.2 PCR擴增
建議選用商品化的試劑盒進行PCR擴增,每批檢驗均應有陽性對照樣本(已知濃度和基因型的對照品DNA和/或以前檢驗過的、已知基因型的樣本)以及不含人基因組DNA的陰性對照樣本。PCR擴增體系與溫度循環參數均按試劑盒的操作說明書進行。
5.4.3 PCR擴增產物的檢測與結果判讀
使用遺傳分析儀,對PCR產物進行毛細管電泳分析,使用等位基因分型參照物(Ladder)來對樣本分型,步驟方法按照儀器操作手冊。
6、相關參數計算方法
6.1 三聯體親權指數(符合遺傳規律)的計算
見表1。
表1 三聯體常染色體STR基因座親權指數計算公式
生   母
基因型
孩   子
基因型
生父基因
(推斷)
被 檢 父
基因型
PI值計算
公式
PP PP P PP 1/p
PP PQ Q QQ 1/q
PP PP P PQ 1/(2p)
PP PQ Q QR 1/(2q)
PP PQ Q PQ 1/(2q)
PQ QQ Q QQ 1/q
PQ QR R RR 1/r
PQ QR R RS 1/(2r)
PQ PR R PR 1/(2r)
PQ QQ Q QR 1/(2q)
PQ PQ P或Q PP 1/(p+q)
PQ PQ P或Q QQ 1/(p+q)
PQ PQ P或Q PQ 1/(p+q)
PQ PQ P或Q PR 1/[2(p+q)]
 
注:p、q、r分別表示等位基因P、Q、R的分布頻率。

6.2 三聯體親權指數(不符合遺傳規律)的計算
見表2。
表2 遇到不符合遺傳規律時常染色體STR親權指數(PI)計算實例
( 以D13S317為例,平均突變率為0.002 )
基因座 母親 孩子     被檢測男子 親權指數
D13S317 7 7-8 9-11 µ / (4p8)
D13S317 7 7-8 10-11 µ / (40p8)
D13S317 7 7-8 11-12 µ / (400p8)
D13S317 7 7-8 9 µ / (2p8)
D13S317 7-8 8 9 µ / (2p8)
D13S317 7-8 8 7-9 2µ / (4p8)
D13S317 7-8 8 9-11 µ / (4p8)
D13S317 7-9 7-9 10-11 µ / [4(p7 + p9)]
D13S317 7-9 7-9 10 µ/ [2(p7 + p9)]
D13S317 7-9 7-9 8-10 3µ / [4(p7 + p9)]
注:1) 表中p7、p8、p9為相應等位基因7、8、9的頻率。
2) 如果母親的表型為QQ, 孩子的表型為PQ, 被檢測男子表型為P'R, 其中P' 比P小或大1個或2個重復單位(s=1或2)。µ為該基因座平均突變率。p為等位基因P的頻率。
如果突變為1步(s=1), 則:PI =X/Y = µ/(4p)
如果突變為2步(s=2), 則:PI =X/Y = µ/(40p)
余此類推。
3) 偶爾會遇到不能區分STR不符合遺傳規律的現象是源自母親或是源自被檢測男子。此時親權指數的計算應考慮男女突變率不相同。例如:D13S317基因座,母親為7-8,孩子為7-9,被檢測男子為7-8。父權指數計算方法為:

式中,mutf 8-9為被檢測男子的等位基因8突變為9的概率;mutm8®9為母親的等位基因8突變為9的概率。μf為男性突變率,μm為女性突變率。通常,男性突變率高于女性突變率。例如,男性突變率可取值0.002,而女性突變率可取值0.001~0.0005,為了便于實驗室間的數據比較,推薦女性突變率可取值0.0005。
6.3 二聯體親權指數(符合遺傳規律)的計算
見表3。
表3 二聯體常染色體STR基因座親權指數計算公式
孩   子
基因型
被 檢 父
基因型
PI值計算
公式
PP PP 1/p
PP PQ 1/(2p)
PQ PP 1/(2p)
PQ PQ (p+q)/(4pq)
PQ PR 1/(4p)
 
注:p、q、r分別表示等位基因P、Q、R的分布頻率
6.4 二聯體親權指數(不符合遺傳規律)的計算
見表4。
表4 二聯體中存在不符合遺傳規律時遺傳標記親權指數計算實例
( 以D7S820為例,平均突變率為0.002 )
基因座 孩子 被檢測男子
(被檢測女子)
親權指數
D7S820 7-8 9-11 µ/(8P8)
D7S820 7-8 10-11 µ/(80P8)
D7S820 7-8 11-12 µ/(800P8)
D7S820 7-8 9 µ/(4P8)
D7S820 8 9 µ/(2P8)
D7S820 8 7-9 2µ/(4P8)
D7S820 8 9-11 µ/(4P8)
D7S820 7-9 8-10 µ(2P7+P9)/(8P7P9)
D7S820 7-9 8 µ(P7+P9)/(4P7P9)
D7S820 7-9 6-10 µ(P7+P9)/(8P7P9)
 
注:1) 表中p7、p8、p9為相應等位基因7、8、9的頻率。
2) 如果孩子的表型為PQ,被檢測男子表型為P'R,其中P'比P小或大1個或2個重復單位(s=1或2),µ為該基因座平均突變率,p為等位基因P的頻率,則親權指數計算方法為:
突變為1步(s=1),則: PI =X/Y = µ/(8p)
突變為2步(s=2),則: PI =X/Y = µ/(80p)
突變為3步(s=3),則: PI =X/Y = µ/(800p)
余此類推。
7、鑒定意見
7.1 鑒定意見是依據DNA分型結果,對是否存在血緣關系作出的判斷。鑒定意見一般分“排除存在親權關系”和“支持存在親權關系”兩種情形。
7.2 三聯體親子鑒定和二聯體親子鑒定實驗使用的遺傳標記累計非父排除率均應不小于0.9999,三聯體親子鑒定和二聯體親子鑒定累計非父排除率的計算參見附錄A。
7.3 為了避免潛在突變影響,任何情況下都不能僅根據一個遺傳標記不符合遺傳規律就作出排除意見。
7.4 任何情況下都不能為了獲得較高的累計親權指數,將檢測到的不符合遺傳規律的遺傳標記刪除。累計親權指數的計算見附錄B。
7.5 在滿足7.1~7.4的條件下,被檢測男子的累計親權指數小于0.0001時,支持被檢測男子不是孩子生物學父親的假設。鑒定意見可表述為:依據現有資料和DNA分析結果,排除被檢測男子是孩子的生物學父親。
7.6 在滿足7.1~7.4的條件下,被檢測男子的累計親權指數大于10000時,支持被檢測男子是孩子生物學父親的假設。鑒定意見可表述為:依據現有資料和DNA分析結果,支持被檢測男子是孩子的生物學父親。
7.7 在不能滿足7.5或7.6的指標時,應通過增加檢測的遺傳標記來達到要求。
8、鑒定文書
親子鑒定文書的格式要求參照司法部司法鑒定管理局頒布的親子鑒定文書規范。
9 特別說明
9.1 本規范適用的三聯體親子鑒定類型包括被檢測男子、孩子及其母親構成的三聯體和被檢測女子、孩子及其父親構成的三聯體兩種類型。
9.2 本規范適用的二聯體親子鑒定類型包括被檢測男子及孩子構成的二聯體和被檢測女子及孩子構成的二聯體兩種類型。
9.3 對于補充檢驗的Y-STR、X-STR或線粒體DNA檢測結果,建議僅對Y或X染色體或線粒體特殊的遺傳規律進行描述性分析,不推薦僅依據補充檢驗的Y-STR或X-STR或線粒體DNA檢測結果出具明確的鑒定意見,也不推薦依據Y-STR或線粒體DNA計算得到的親緣關系指數與依據常染色體STR計算得到的親緣關系指數聯合計算。
9.4 如果在鑒定書里使用其他數學或詞語的表達式時,應定義并解釋其含義,使委托人或法庭了解其意義。如要將親權指數值轉換為傳統使用的父權相對機會,應同時給出轉換時所采用的前概率。例如,某案累計親權指數為10000時,可以表述為本案累計親權指數為10000,在假定父權前概率為0.5時,父權相對機會為0.9999。
9.5 本技術規范在7.5或7.6中的鑒定意見是以不考慮雙胞胎或者近親情況為前提的。近親情況應采用另外的公式,并需全面、系統地結合其他因素做綜合分析。
 
 附 錄 A-(規范性附錄)
  排除概率計算
 A.1  排除概率(PE)確切地說應該是非父排除概率,指對于不是孩子生父的隨機男子,遺傳分析系統具有的排除能力。它是遺傳分析系統效能的評估指標。
A.2  排除概率的計算
目前常用的DNA遺傳標記,如STR一個基因座有多個等位基因,并且均為顯性。設pi代表群體中第i個等位基因頻率, pj代表群體中第j個等位基因頻率, 并且等位基因i不等于等位基因j,則排除概率為:
1)三聯體親子鑒定

2)二聯體親子鑒定  

 
A.3  上述公式是對于一個基因座而言的。親子鑒定不止使用一個基因座,有必要知道使用的全部遺傳標記對于不是孩子生父的男子,否定父權有多大的可能性,即累計排除概率(cumulative probability of exclusion,CPE)。
計算累計排除概率的前提條件是一個遺傳標記系統獨立于另一個系統。累計排除概率計算公式為:

上式中,PEk為第k個遺傳標記的PE值。求出各個遺傳標記的PE值后,可按公式求出累計排除概率(CPE)。
 
附 錄 B(規范性附錄)
累計親權指數計算 
多個遺傳標記用于親子鑒定時,設每個遺傳標記的親權指數分別為PI1,PI2,PI3,…PIn,n個遺傳標記的親權指數相乘則為累計親權指數(Combined paternity index,CPI),則:
CPI=PI1×PI2×PI3×…×PIn (1、2、3、n代表第1、2、3、n個基因座的PI值)


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